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植物CRISPR單堿基編輯
由于同源重組修復與非同源末端連接相比發生頻率較低,所以科學家開發了用于單堿基編輯的系統。該單堿基編輯系統不需要誘導DNA雙鏈斷裂,也不需要加入DNA修復模板即可實現位點單堿基的改變。該技術已成功地應用于多種單子葉植物和雙子葉植物,如小麥、水稻、玉米、擬南芥和番茄等。
CRISPR單堿基編輯系統包含一個失活的Cas9(dead Cas9,dCas9)或僅可造成缺口的Cas9(Cas9 nickase,nCas9)和胞苷脫氨酶或腺嘌呤脫氨酶。胞嘧啶堿基編輯系統(cytidine base editors,CBEs)可將胞嘧啶(C)轉變為尿嘧啶(U),尿嘧啶隨后通過DNA復制或修復的方式轉變為胸腺嘧啶(T)。類似地,腺嘌呤堿基編輯系統(adenine base editors,ABEs)可將腺嘌呤(A)轉變為肌苷(I),然后轉變為鳥嘌呤(G),從而實現A到G的轉換。
圖1. 具代表性的胞嘧啶(左)和腺嘌呤(右)單堿基編輯系統(Eid et al., 2018)。
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