植物TALENs基因編輯

類轉錄激活因子效應物核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALENs）是一種多功能的基因組編輯工具，已在植物基因功能研究和育種中得到了廣泛的應用。與鋅指核酸酶（zinc finger nucleases，ZFNs）相比，該技術具有脫靶率低和細胞毒性低的優點，TALENs采用簡單的蛋白質- DNA識別機制。蘇州飛凡標準技術服務有限公司擁有豐富的植物基因編輯經驗。

TALENs由DNA結合域和具限制性內切酶活性的FokI組成（圖1）。DNA結合域通常由1.5-33.5個串聯重復序列組成。每個重復序列包含34個氨基酸，其中第12和第13個氨基酸為可變的，稱為“重復可變雙殘基”（repeat variable diresidues，RVDs），它們可特異性地識別一個核苷酸。簡而言之，RVDs的解碼機制是NI （Asn Ile）、HD （His Asp）、NN （Asn Asn）和NG （Asn Gly）可分別識別A、C、G、T（圖1）。由FokI組成的DNA切割域通常以二聚體的形式行使功能，且可切割序列從而造成DNA雙鏈斷裂。斷裂的DNA雙鏈一般通過非同源末端連接或同源重組修復兩種方式進行修復，修復過程中會在斷裂位點產生不同形式的突變：如點突變、缺失、插入、倒置、復制和易位等。

圖 1. 類轉錄激活因子效應物核酸酶的結構（Wei et al., 2013）。

蘇州飛凡可提供多種技術來實現TALE蛋白的定制合成，如限制性酶切連接法（restriction enzyme and ligation，REAL）、基于PCR的gold gate法（GG-PCR）、基于質粒載體的GG法（GG-Vector）、高通量TALE合成技術（fast ligation-based automatable solid-phase high-throughput，FLASH）、迭代加帽組裝法（iterative capped assembly，ICA）、基于長粘末端的LIC（ligation-independent cloning）組裝法和單元組裝法（unit assembly，UA）等。我們還可以提供修飾的FokI，從而可以使它形成異源二聚體，提高剪切特異性。我們可以提供多種植物的遺傳轉化，如擬南芥、水稻、小麥、苜蓿、玉米、煙草和棉花等，可以滿足客戶的不同需求。

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